FINALIDADESistema para coloração de células em esfregaços de sangueperiférico, medula óssea ou para estudo citológico deelementos celulares colhidos por punção, raspagem ouconcentrados de elementos celulares de derramescavitários.Somente para uso diagnóstico in vitro.

PRINCÍPIOOs corantes para esfregaços sangüíneos, também chamadosde pancrômicos, são uma mistura de corantes decaracterísticas neutras, dependentes do pH da soluçãocorante, que em condições apropriadas coram oscomponentes nucleares e citoplasmáticos dos leucócitos,com predominância de tons vermelhos (quando ácidos) eazulados diversos (quando básicos).O corante de May-Grunwald (1902) é uma mistura de eosinae azul de metileno (não oxidados), que quimicamente setransforma em eosinato de azul de metileno.Giemsa (Alemanha) desenvolveu, no mesmo período, umcorante que leva seu nome e que hoje se sabe ser uma misturade azur I (mistura equimolar de azur 1 e azul de metileno) eeosinato de azur I (corante formado pela combinaçãoequimolar de azur 1, azul de metileno e eosina amarelada).Esses dois corantes são utilizados através de um métodode coloração mais demorado, em que após fixação ecoloração pelo May Grunwald, se processa uma segundacoloração com solução de Giemsa, obtendo-se um resultadofinal melhor e mais detalhado.A necessidade de um único corante, que pudesse corarglobalmente os elementos celulares com os detalhes do MG-Giemsa, levou ao desenvolvimento de novos corantes:Leishman (Inglaterra,1901) e Wright (Inglaterra,1902). Sãocorantes basicamente idênticos, compostos de eosinaamarelada e produtos de oxidação do azul de metileno. Adiferença entre ambos se restringe ao fato de que o processode maturação é mais longo na feitura do corante Leishman(em pó).

REAGENTES E APRESENTAÇÃOCorante seg. Leishman apresenta a seguinteformulação:Corante Leishman, em pó1,5gMetanol (tamponado pH 6,8)1000mL

PARTICULARIDADES DOS CORANTES PANCRÔMICOSDOLESNa manipulação dos corantes pancrômicos são utilizadoscorantes específicos, previamente aprovados e deprocedência tradicional. O solvente é representado pormetanol, grau analítico, tamponado a pH 6,7 - 6,8. Apresentação Frasco de 500mL Frasco de 1000mL

ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DO REAGENTEO corante deve ser mantido no frasco original, bem vedado,à temperatura ambiente (20-30C) e ao abrigo da luz solar.Sob essas condições, permanece estável até a data devencimento indicada no rótulo do frasco.Na prática diária o corante é utilizado sob forma de gotas.Sugere-se o uso de pequeno frasco conta-gotas,periodicamente alimentado com o corante do frasco estoque.

CUIDADOS E PRECAUÇÕES COM O USO DOSREAGENTESPor tratar-se de uma solução alcoólica, deve-se tomar oscuidados inerentes ao uso do álcool em laboratório. Evitepipetar o corante com o uso da boca. A ingestão acidentaldo metanol, dependendo da quantidade absorvida, podeser fatal. As soluções corantes são para uso exclusivoin vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se ocontato com pele e mucosas. Em caso de contaminaçãoacidental, lavar a área afetada em água corrente. O descartedo material utilizado deverá ser feito obedecendo-se aoscritérios de biossegurança estabelecidos pelo laboratório,de acordo com as normas locais, estaduais ou federais.

AMOSTRASangue periférico colhido por punção digital ou de coletavenosa, com o uso de anticoagulantes adequados (heparinaou soluções de EDTA). Esfregaços de medula óssea econcentrados celulares de derrames cavitários. Osesfregaços feitos a partir de sangue colhido comanticoagulantes devem ser confeccionados em até 30minutos, para se evitar deformações celulares sob efeitodo anticoagulante (ver nos desenhos como fazer esfregaçossangüíneos).Todas as amostras biológicas devem serconsideradas como potencialmente infectantes. 1. Dispensar uma gota de sangue sobre a lâmina.

2. Com o uso de uma lâmina extensora, realizar o esfregaço.

3. O esfregaço deve ser uniforme em toda a lâmina.

4.Desenho esquemático de esfregaço. Resultadoshomogêneos na contagem diferencial são obtidosexaminando-se a porção mediana do esfregaço.

Observar ainda a simbologiaconstante nos rótulos do produto: IrritanteInflamável

SAC: (62) 3269 0 (Grande Goiânia) / 0800 644 6433 (Demais localidades) / FAX: (62) 3269 0001

PROCEDIMENTO TÉCNICO1. Fazer os esfregaços. Após secarem à temperaturaambiente estão prontos para serem corados. Em dias frios,agitar as lâminas para acelerar o processo de secagem.2. Cobrir cada lâmina com 10 a 15 gotas do corante, deacordo com a extensão do esfregaço.3. Fixar a lâmina com o corante durante um minuto.4. Distribuir sobre a lâmina igual número de gotas de águadestilada ou solução tampão. Homogeneizar a mistura decorante com água. A partir deste momento, começa aatividade de coloração. Corar por 3 a 4 minutos. O tempode coloração depende da extensão e da espessura doesfregaço.

RESULTADOS ESPERADOS Hemácias : róseo Plaquetas : azul Leucócitos: ••••• Linfócitosnúcleo: azul-violetacitoplasma: azul

•••••Eosinófilosnúcleo: azulcitoplasma: rosa pálidogrânulos volumosos: vermelho a vermelho laranja LIMITAÇÕES DO SISTEMA

CONTROLE DE QUALIDADE DO SISTEMA1.O controle de qualidade em microscopia de esfregaçossangüíneos depende diretamente da formação e daexperiência do profissional que avaliará a qualidade dosesfregaços, coloração, etc..2.A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizadosão de fundamental importância para a estabilidade dosreagentes e obtenção de resultados corretos. Não usardetergente à base de fosfatos.3.A água utilizada na limpeza do material e no preparo dosreagentes deve ser de boa qualidade. 4.Colunas deionizadoras saturadas liberam íons diversos,aminas e agentes oxidantes, que deterioram os reagentes.5.As lâminas para confecção do esfregaço devem estarperfeitamente limpas, isentas de gordura e polidas.6.A gota de sangue não deve ser muito grande. Quantomaior a gota, mais espesso o esfregaço.7.O esfregaço satisfatório deve ser fino e homogêneo, demargens livres, pois só os que reúnem estas condiçõesapresentam os leucócitos e eritrócitos sem deformaçõese convenientemente distribuídos.

CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO Reprodutibilidade: nos testes com corante hematológico Leishman, realizados em 10 indivíduos escolhidos aleatoriamente, foram confeccionados dois esfregaços para cada indivíduo, totalizando 20 lâminas estudadas. Utilizamos amostras sem anticoagulantes e lâminas novas, portanto desengorduradas, para os esfregaços. Foi utilizada água recém deionizada para diluição do corante. O procedimento técnico seguiu rigorosamente as instruções de uso. Houve total concordância das características tintoriais de eritrócitos, neutrófilos, linfócitos, monócitos e plaquetas, entre as lâminas estudadas. Observamos que a reprodutividade do corante está relacionada com a qualidade da água, qualidade do metanol, limpeza da lâmina onde foi confeccionado o esfregaço e tempo de coloração.

Repetitividade: durante l2 meses consecutivos foram realizados testes em esfregaços sangüíneos confeccionados e corados em condições ideais, utilizando-se o mesmo lote do corante. Houve concordância das características tintoriais dos elementos sangüíneos durante todo o período de teste.

Métodos de laboratório aplicados à clínica, 21-9 a 21-12; 1992.

TERMOS E CONDIÇÕES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei n 8.078, de 1 de setembro de 1.990 - Código de Defesa do Consumidor. Todos os reagentes que compõem este sistema para diagnóstico são garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade até a data de vencimento dos mesmos, se obedecidas as condições abaixo: 1.O usuário do sistema seguir, rigorosamente, o procedimento técnico. 2.As condições de armazenamento deverão estar de acordo com o estabelecido nas instruções de uso. 3.Os materiais necessários e não fornecidos deverão estar em boas condições técnicas.

Todos os produtos que apresentarem problemas técnicos comprovados serão substituídos, sem ônus para o consumidor.

Doles Reagentes e Equipamentos para Laboratórios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 1273, Lt.07, Chácara Retiro CEP: 74001-970 Goiânia - GO - Brasil Caixa Postal 1051 e-mail: doles@doles.com.br w.doles.com.br

M.S.: n10231810003 Revisão: 10 (04/2007)

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