metodo do biureto

metodo do biureto

Procedimento Experimental

Matérias:

-Leite Desnatado

-Ácido clorídrico 10%

-Sulfato de amônio supersaturado

-Reativo de Biureto

-Tubos de ensaio

-Pipetas

-Copos de Becker

-Espectrofotômetro

Procedimento:

Dosagem de proteínas totais

1-Diluiu-se 2 mL de leite bovino em 8,0 mL de água destilada

2-Determinou-se a concentração de proteínas do leite diluído pelo método do Biureto

3-Determinou-se a concentração de proteína do leite diluído(mg/mL) comparou-se com a leite do padrão (soro albumina bovino – BSA – 5mg/mL).

4-Fez-se as correlações necessárias tendo em vista a diluição da amostra

5-Expressou-se o resultado em gramas de proteína por 100mL de leite (g%) e calculou-se a porcentagem de caseína do leite total.

Precipitação da caseína e dosagem das proteínas do filtrado

1-Transferiu-se 10mL de leite bovino desnatado para um copo de Becker de 50mL

2-Adicionou-se 10mL de água destilada morna

3-Com uma pipeta de 2mL acrescentou-se a solução de ácido clorídrico 10%, gota a gota e com agitação constante, até que observou-se a coagulação do leite. Após a precipitação, observou-se o pH da amostra e anotou-se.

4-Aguardou-se a sedimentação do precipitado e filtrou-se o sobrenadante.

5-Determinou-se a concentração de proteína do filtrado pelo método do Biureto.

6-Determinou-se a concentração de proteína(mg/mL) do filtrado comparando com a leitura do padrão

7-Fez-se as correlações necessárias tendo em vista a diluição da amostra.

8- Expressou-se o resultado em gramas de proteína por 100mL de leite(g%)

Precipitação com sulfato de amônio

1-Adicionou-se 2mL da solução anterior (após filtração) com 4mL de solução de sulfato de amônio supersaturada. Observou-se. Adicionou-se 4 mL de água destilada e observou-se o efeito.

2-Deixou-se a mistura em repouso por 5 minutos e centrifugou-se por 5minutos.

3-Reservou-se o sobrenadante

4-Determinou-se a concentração de proteínas do sobrenadante pelo método de Biureto

5-Determinou-se a concentração de proteínas (mg/mL) do precipitado comparando-se com a leitura do padrão (BSA-5mg/mL)

6- Fez-se as correlações necessárias tendo em vista a diluição da amostra

7-Expressou-se o resultado em gramas de proteina por 100mL de leite(g%)

Dosagem de proteínas pelo método do Biureto

1-Adicionou-se as amostras em uma tabela.

2-Agitou-se os tubos e deixou-se em repouso por 10minutos.

3-Determinou-se a absorbância em espectrofotômetro(540nm)

Resultados e Discussão

TUBOS

AMOSTRA

AMOSTRA

BIURETO

ABSORBÂNCIA

1

Água – branco

1mL

5mL

0,000

2

Padrão –BSA(5mg/mL)

1mL

5mL

0,253

3

Leite diluído

1mL

5mL

0,250

4

Filtrado do precipitado com HCl

1mL

5mL

0,089

5

Sobrenadante do precipitado com (NH4)2SO4-1x

1mL

5mL

0,049

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