Sistema complemento, Notas de estudo de Bioquímica

Baixe Sistema complemento e outras Notas de estudo em PDF para Bioquímica, somente na Docsity! Sistema complemento Análises clínicas Tânia Silvia Fröde Sistema complemento 1. Definição 2. Funções 3. Vias de ativação do complemento 3.1 Via Clássica 3.2 Via Alternativa 3.3 Via Comum 4. Sistema Complemento e doenças 5. Técnicas Laboratoriais 5.1 CH 50 5.2 AH 50 Via Clássica 3. Vias de ativação Via Alternativa Via Comum Via da Manose Imunocomplexo, apoptose, vírus, bactérias G-, PCR vírus, bactérias, viroses, tumor Micróbios com grupamento manose Via Clássica 3. Vias de ativação Ag Ac C1 C4 C2 C3 convertase C3bb C4a b C2a C3 C3a C3b C5 convertase C5 C5a C5b Via Comum Via Clássica 3. Vias de ativação Ag Ac C1 C4 C2 C3 convertase C3bb C4a b C2a C3 C3a C3b C5 convertase C5 C5a C5b Via Comum MASP1, 2, 3 Turgeon M.L. Immunology and serology in laboratory medicine, 2009, 4ed. 2. Funções Opsonização na fagocitose: C3B, IC3B Anafilaxilatoxina/inflamação (resposta vascular) C5A>C3A>C4A Ativação de PMN: C5A Lise celular: C5-C9 Remoção de complexo imune/ativação de LB: C3B, iC3b, C3dg (via clássica) Elevado níveis do complemento Inflamação Trauma Doença aguda (infarto agudo miocárdio) Limitado valor clínico 4. Sistema complemento e doenças Deficiência do Complemento Deficiência/doença associada  C3 inativador: infecções piogênicas recorrentes, urticária.  C4: síndrome LES-like, LES, síndrome dermatomiosite-like, vasculitis  C5: infecções por Neisseria, LES  C5: disfunção: doença de Leiner, infecções de pele e óssea por bactérias G-  C6: Infecções por Neisseria, LES, fenômeno de Raynauld, síndrome da esclerodermia-like, vasculite  C7: Infecções por Neisseria, LES, fenômeno de Raynold, síndrome da esclerodermia-like, vasculite  C8: Infecções por Neisseria, xerodermia pigmentosa, síndrome LES-like 4. Sistema complemento e doenças Doenças associadas com a hipocomplementemia Doenças reumáticas com formação de imunocomplexos - LES - Arttrite reumatóide (com doença extra-articular) - Vasculite sistêmica - Crioglobulinemia Glomerulonefrites - - pós-estreptocócica - Membranoproliferativa Turgeon M.L. Immunology and serology in laboratory medicine, 2009, 4ed. 4. Sistema complemento e doenças Doenças associadas com a hipocomplementemia Doenças infecciosas - Endocardite bacteriana subaguda - Sepsis por pneumococos e gram-negativos - Viremias (hepatite B, sarampo) - -Infecções parasitárias (malária) Deficiência de proteínas C1 INH – angiodema Deficiencia fator 1 Deficiencia fator H Turgeon M.L. Immunology and serology in laboratory medicine, 2009, 4ed. 7. Técnicas laboratoriais DOSAGEM DE CH50 Material: soro Método: ELISA ou Hemólise total  DOSAGEM DE C3 e C4 Material: soro Método: Nefelometria  DOSAGEM C1 inibidor Material: soro Método: ELISA Dosagem de CH50 (Reação de hemólise total) CH50 Dosagem da atividade do sistema complemento Método: Reação de hemólise total Princípio: O complemento atua sobre os eritrócitos de carneiro, sensibilizados com anti- eritrócito de carneiro, hemolisina, provocando a lise em 50% desses eritrócitos, provando o extravasamento de Hemoglobina. CH50 Diluição da hemolisina: Ex: 1 UH------1\2000 2 UH------1\1000 4 UH------1\500 1-------------500mL X--------------10mL X=0,02 mL q.s.p 10 mL Hemácias de carneiro a 5%: 5-------------100mL X--------------10mL X=0,5 mL q.s.p 10 mL CH50 Preparação do sistema hemolítico: SISTEMA HEMOLÍTICO 19/05/2004 1 parte de Hemácias de carneiro a 5% + 1 parte de Hemolisina a 4 UH. Ag – hemácias de carneiro Ac – hemolisina 4 UH  Incubar em B.M. 37 ºC por 15 minutos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 CN Soro (mL) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.05 0.03 0.02 0.01 - Salina (mL) - 0.1 0.2 0.3 0.4 0.45 0.47 0.48 0.49 0.5  Colocar 0.5 mL de Sistema hemolítico 4 UH em todos os tubos  Incubar em B.M. 37 oC por 30 minutos.  Centrifugar a 1500 rpm por 5 minutos.  Leitura: Observar o último tubo onde ocorreu hemólise. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 CN Atividade 0% 20 % 40 % 60 % 80 % 90 % 94 % 96 % 98 % - CH50 Dosagem de AH50 (Dosagem da via alternativa) AH50 Dosagem do sistema properdina ou via alternativa Definição: Ensaio hemolítico, cujo fundamento é a lise de eritrócitos de coelho mediada pelo complemento utilizando tampão EGTA que inibe a macromolécula C1, impedindo a ativação do Sistema Complemento pela via Clássica. AH50 Eritrócitos de coelho Via Alternativa Soro + Tampão (EGTA) AH50 500-500500500500500Tampão (L) -500-----Água destilada 500500-----Hemácias de coelho (L) --500400300200160Amostra (L) Controle Tampão CH total 54321Tubos Incubar durante 1 h em Banho Maria a 37 oC com agitação constante Metodologia: AH50 NaCl (0,15 M) gelado (mL) --44444 Centrifugar a 1000 g por 20 minutos Determinar a absorbância do sobrenadante A414 Controle Tampão CH total 54321Tubos A AH50 é determinado pela diluíção do soro que promove a hemólise em 50% Continuação AH50 Cálculo de 50% de hemólise Resultado: Expresso 1/volume de soro = (ml x 10 –1) Amostra A 414 - Controle tampão A 414 Total de lise A 414 - Controle tampão A 414 Y = Este cálculo vale para cada diluíção da amostra (cada ponto) 5. Sistema complemento e doenças Deficiências em componentes RESULTADO DEFICIÊNCIA CH50 = BAIXO AH50 = NORMAL C1q, C1r, C1s, C2, C4, C1-INH AH50 = = BAIXO CH50 = NORMAL Properdina, fator D ou B CH50 = BAIXO AH50 = BAIXO C3, C5, C6, C7, C8, C9 CH50 E AH50 = BAIXO C3 = BAIXO, COMPONENTES DA CASCATA FINAL Fator H, Fator I HER briga: ela atenção