Baixe imunodiagnóstico de parasitas bom e outras Manuais, Projetos, Pesquisas em PDF para Farmácia, somente na Docsity! INTRODUÇÃO As parasitoses são causas relevantes de agravo à saúdeem países subdesenvolvidos e em desenvolvimento, onde condições sócio-econômicas-culturais permitem a manutenção e disseminação de ciclos biológicos de vários parasitas. 0s parasitas intestinais são um dos principais fa- tores debilitantes da população, associando-se freqüente- mente a quadros de diarréia crônica e desnutrição, com- prometendo o desenvolvimento físico e intelectual, parti- cularmente das faixas etárias mais jovens da população (LUDWING, 2005; VAZ, 2001). Em decorrência dos efeitos deletérios à saúde dos indivídu- os e, sobretudo, das repercussões econômicas, vários pro- gramas têm sido dirigidos para o controle das parasitoses intestinais em diferentes países, mas, infelizmente, consta- ta-se um descompasso entre o êxito alcançado nos paises mais desenvolvidos e aquele verificado nas economias mais pobres. Além do custo financeiro das medidas técni- cas, a falta de projetos educativos com a participação da comunidade dificultam a implementação das ações de con- trole (LUDWING, 2005). A parasitologia é uma importante área de estudo, desta- cando-se no desenvolvimento de métodos diagnósticos que possam contribuir para estabelecer adequadamente a etiologia da infecção para a correta intervenção terapêuti- ca; avaliar a freqüência de determinadas parasitoses em diferentes áreas, auxiliando no direcionamento de medidas de intervenção local e avaliar a eficiência de medidas pro- filáticas e terapêuticas ao longo do tempo (DE CARLI et al, 1997; VAZ, 2001). O diagnóstico de certeza de um processo parasitológico é dado pela demonstração da presença do parasito ou de seus produtos no organismo do hospedeiro. Entretanto, nem sempre é possível ou fácil de comprovar a existência do parasitismo (REY, 2001). Segundo Rey, 2001, os métodos imunológicos diretos e in- diretos têm sido muito empregados, para detectar antíge- nos, anticorpos ou imunocomplexos relacionados com a existência da infecção parasitária. Esses métodos se carac- terizam pela simplicidade e rapidez de execução, possibi- lidade de automação e baixo custo operacional. Podem ser aplicados em pacientes para o diagnóstico diferencial en- tre as doenças com quadros clínicos semelhantes que pos- sam estar sendo causa do processo patológico, bem como nos inquéritos epidemiológicos. A pesquisa de anticorpos em uma população, ou em amos- tras representativas, tem sido utilizada com freqüência pa- ra determinar a prevalência de uma parasitose. No entan- to, os testes imunológicos devem ser devidamente inter- pretados para se evitarem falhas e falsos resultados que podem decorrer da variação antigênica do patógeno ou da resposta imune do hospedeiro (REY, 2001). Na etapa de padronização dos testes imunológicos são uti- lizadas amostras de referência, positivas e negativas, para a doença em questão. Portanto, a adequada escolha dessas amostras é importante para a definição da referência padrão ouro (gold standard) (VAZ, 2001). Existem duas características que parecem dificultar a pa- dronização dos testes imunológicos. A primeira é a memó- ria imunológica, pois são detectados anticorpos em pacien- tes com a doença, naqueles que já estão curados da in- 15RBAC, vol. 39(1): 15-19, 2007 Infecções parasitárias: diagnóstico imunológico de enteroparasitoses* Parasital Infetion: immunologic diagnostic of enteroparasitosis Marilei Uecker1, Caroline E. Copetti2, Luciana Poleze2 & Vanessa Flores2 RESUMO - As enteroparasitoses são causas relevantes de agravos à saúde em paises onde as condições sócio-econômicas-culturais permitem a manutenção e disseminação de vários parasitas. O desenvolvimento de métodos de diagnóstico para a parasitologia é de fundamental importância no estabelecimento da etiologia das infecções para correta intervenção terapêutica. O diagnóstico imunoló- gico tem sido muito empregado no laboratório clínico pela simplicidade, rapidez de execução e baixo custo operacional. No entanto, existem dificuldades para a padronização dos testes imunológicos em relação à memória imunológica e à semelhança entre os antí- genos constituintes dos parasitos, restringindo seu uso no diagnóstico de algumas patologias. Atualmente, o que se observa, no que diz respeito ao diagnóstico imunológico de parasitoses intestinais, é a dificuldade de padronização destes testes por apresentarem bai- xa sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade e custos elevados para o isolamento de antígenos e anticorpos. Após a realização desta revisão bibliográfica constatou-se, que dentre todas as técnicas utilizadas na rotina para imunodiagnóstico de parasitoses intes- tinais, o ELISA destaca-se como método de escolha por apresentar melhor especificidade e sensibilidade. PALAVRAS-CHAVE - Imunodiagnóstico, enteroparasitoses. SUMMARY - The enteroparasitosis are considerable causes of damage to the health in countries where the socio-economical-cultu- ral conditions allow the maintenance and dissemination of several parasites. The development of diagnostic methods to the parasito- logy is important to establish the infection,s etiology to the correct therapeutic intervention. The immunnological diagnostic has been very engaged by simplicity, quickness of execution and cheap operational cost. However, there are difficulties to the standardization of the immunologic tests in relation to the immunologic memory and the resemblance among the parasites constituent antigens. No- wadays, what is observed in respect to the immunologic diagnostic of intestinal parasitosis is the diffficulty of standardization of tho- se tests for presenting slow sensibility, specificity, reproductivity and high cost to the isolation os antigens and antibodies. Before the realization this bilbiographic revision, it verified from among all the technics used in the rotine to immunodiagnostic of intestinal pa- rasitosis ELISA, distinguishes as method of choice by presenting better specificity and sensibility. KEYWORDS - Immunodiagnostic, enteroparasitosis. Recebido em 18/01/2006 Aprovado em 28/09/2006 *Componente curricular Análises Parasitológicas. Curso de Farmácia Habilitação Bioquímico em Análises Clínicas-UNIJUÍ. 1Farmacêutica. Mestre em Ciências Farmacêuticas. Docente do DCSa-UNIJUÍ – RS. Autora responsável (marileiu@unijui.tche.br) 2Farmacêuticas. Acadêmicas do Curso de Farmácia Habilitação Bioquímico em Análises Clínicas-UNIJUÍ-RS. fecção, bem como naqueles que tiveram contato com o pa- rasito mas não foram infectados e nos vacinados. A segun- da característica adversa na padronização dos testes imu- nológicos diz respeito à freqüente semelhança entre os an- tígenos constituintes dos parasitos. Ainda, permanece co- mo área de interesse o desenvolvimento de testes rápidos e a utilização de amostras biológicas de fácil obtenção, co- mo saliva ou sangue total de punção de polpa digital em papel filtro ou outras formas com fácil obtenção do materi- al biológico (VAZ, 2001). O presente trabalho tem como objetivo fazer uma revisão bibliográfica em material impresso e em sites de busca da internet como scielo e birene sobre o diagnóstico imunoló- gico das parasitoses intestinais, a fim de se verificar a pos- sibilidade de aplicação desses métodos na clínica. A seguir são descritas as principais parasitoses intestinais e suas particularidades encontradas quanto ao diagnóstico utili- zando testes imunológicos. DIAGNÓSTICO IMUNOLÓGICO Criptosporidiose A criptosporidiose é causada por protozoários de gênero Cryptosporidium e a doença se caracteriza por diarréia aguda no homem e em outros animais. A transmissão do parasito ocorre por via fecal-oral, com ingestão de alimen- tos e água contaminada com fezes de humanos ou animais infectados (REY, 2001; GOMES, 2004; DE CARLI, 1997). O diagnóstico imunológico pode ser feito utilizando técni- cas como ELISA que detecta coproantígenos nas fezes e pela reação de imunofluorescência direta (IFD) que empre- ga anticorpos monoclonais anti-cryptosporidium marcados com isotiocianato de floresceína. Estes testes, quando ava- liados, demonstram alta sensibilidade, possível de uso pa- ra processamento de grande quantidade de amostra, além de servir para estudos epidemiológicos (GOMES, 2004; LIMA, 2001). Braz et al (1996), utilizando a técnica de imunoflorescência indireta, encontrou imunoglobulinas G e M, no soro huma- no, contra o Cryptosporidium. Demonstrando, assim, a uti- lidade deste teste, associado a outras técnicas parasitológi- cas, em estudos populacionais retrospectivos ou diagnósti- cos na infecção aguda. A PCR (Reação da Polimerase em Cadeia) é uma técnica de biologia molecular para detectar Cryptosporidium em amostras ambientais e fecais. Esta técnica tem a vantagem de permitir a caracterização genotípica das espécies de Cryptosporidium responsáveis por surtos e agravos, forne- cendo subsídios para investigação de prováveis fontes e via de transmissão, por outro lado, o custo é elevado (GOMES, 2004). Ancilostomíase Ancilostomíase é o nome da doença causada por algumas espécies de nematóide da família Ancylostoma ou, mais es- pecificamente, por Necator americanus, por Ancylostoma duodenales e por Ancylostoma ceylanecium. A via de trans- missão é oral e cutânea, sendo que o parasitismo costuma muitas vezes ser assintomático. Pode causar prurido intenso, crises alérgicas e anemia em pacientes sujeitos a infecções intensas, especialmente quando há certo grau de deficiência alimentar (CIMERMAN, 2002; LEITE, REY, 2001). Vários testes imunológicos e sorológicos (precipitação, he- maglutinação, fixação do complemento, difusão em gel, floculação de látex, imunofluorescência, ELISA) evidenci- am reações mediadas por antígenos dos vermes, mas não têm sido utilizados na prática. A intradermorreação pode ser útil em campanhas profiláticas, mas possuí o grande in- conveniente de dar resultados falso-positivos em indivídu- os tratados (LEITE, 2001). Estrongiloidíase O nematódeo do gênero Strongyloides apresenta 52 espéci- es, mas somente duas foram descritas como infectantes do homem: S. stercoralis e S. fuelleborni. Os casos de infecção leve são assintomáticos, os demais produzem quadro de en- terite ou de enterocolite crônica, que pode chegar a ser gra- ve ou fatal em indivíduos imunocomprometidos. A via de penetração é a cutânea, podendo ocorrer infecção também pela via digestiva (COSTA-CRUZ, 2002; REY, 2001). Os métodos imunológicos proporcionam boas indicações para o diagnóstico desta parasitose, pois o parasita dificil- mente é detectado nas fezes de indivíduos que apresentam baixa intensidade de infecção. Destaca-se, também, o em- prego em inquéritos soroepidemiológicos por apresentar elevada sensibilidade com relação aos métodos parasitoló- gicos. Os testes imunológicos são usados para a detecção de antígenos e, na maioria das vezes, anticorpos presentes no soro ou fluídos biológicos (CIMERMAN, 2002; COSTA- CRUZ, 2002; REY, 2001). Madalena et al (2003) constatou em estudos realizados que extrato heterólogo de S. ratti é uma ferramenta útil para a detecção de IgE gênero-específica por ELISA, contribuin- do para uma melhor caracterização do perfil da resposta imune na estrongiloidíase humana. Segundo Costa-Cruz (2002), a maior limitação encontrada na padronização dos testes é a dificuldade de se obter quantidades suficientes de larvas filarióides de S. stercora- lis, situação vencida pelo emprego de S. ratti, S. venezue- lensis ou S. cebus como fonte alternativas de antígenos he- terólogos. Outra limitação é a reação cruzada com outros parasitos, principalmente a esquistossomose, filariose, as- caridíase e ancilostomídeos. A intradermorreação foi a reação pioneira, mas não é utili- zada na rotina diagnóstica. Várias técnicas têm sido descri- tas, incluindo a aglutinação indireta em partículas de gela- tina, hemaglutinação indireta, radioimunoensaio, radioi- munoabsorção, reação de imunofluorescência direta, imu- no-histoquímica; mas, sem dúvida, os testes imunoenzimá- ticos ELISA, o teste de Western blotting e a imunofluore- cência indireta têm provado serem testes eficazes como complementares para o diagnóstico e monitoramento da resposta imune do paciente (REY, 2001; CIMERMAN, 2005; COSTA-CRUZ; 2002). Esquistossomose A esquistossomose é doença causada por vermes do gênero Schistossoma, sendo o S. mansoni, o S. haematobium e o S. japonicum as espécies de interesse médico. O S. mansoni causa a esquistossomose mansônica ou intestinal e pode ser encontrado na América do Sul e Antilhas. O S. japonicum também é causador de doença intestinal, podendo ser en- contrado em países como a Indonésia, China e Filipinas. Es- ses parasitos podem provocar inflamação no trato intestinal, bem como hemorragias (REY, 1992; CIMERMEN, 2002). O diagnóstico da esquistossomose é realizado comumente através do exame parasitológico de fezes, por ser sensível e de fácil execução. O diagnóstico imunológico pode ser realizado utilizando o soro do paciente para pesquisa de anticorpos contra o S. mansoni. Para isto, podem ser reali- 16 RBAC, vol. 39(1): 15-19, 2007