Baixe Trabalho de Coloração e outras Provas em PDF para Microbiologia, somente na Docsity! FACULDADE UNIAO DE GOYAZES CURSO DE ENFERMAGEM METODOS DE COLORAÇÃO TRINDADE 2010 JULIANA PEREIRA DE OLIVEIRA RAMON SILVA BARRETO METODOS DE COLORAÇÃO Trabalho cientifico apresentado a Faculdade União de Goyazes, como quesito obrigatório para obtenção de nota, na disciplina de Microbiologia, no curso de Enfermagem. Prof. Mss. Ursula Nunes Rauecker Trindade 2010 Parede celular: formada por camadas múltiplas externamente à membrana plasmática. Há uma camada mais interna que é composta por peptideoglicana envolta por uma camada mais externa (varia espessura e composição química). A peptideoglicana confere resistência a meios de baixa pressão osmótica como a água, sendo responsável pelo suporte estrutural e também mantém a forma característica da bactéria. A peptideoglicana é um açúcar com grupos amina sendo uma estrutura estável. DIFERENÇAS ENTRE AS PAREDES DAS BACTÉRIAS GRAM + e GRAM – • GRAM positivas: - Camada de peptideoglicana é mais espessa e algumas também possuem uma camada de ácido teicóico externa à camada de peptideoglicana. Acido teicóico: é uma estrutura anti-gênica importante, reconhecida pelo sistema imune (induz formação de anticorpos espécie - específicos). São encontrados na camada externa da parede celular de GRAM +. Alguns polímeros de ácido teicóico penetram através da camada de peptideoglicana, ligando-se covalentemente aos lipídeos da membrana citoplasmática, sendo agora denominada de ácido lipoteicóico, enquanto outros se ligam ao ácido murâmico da peptideoglicana. • GRAM negativas: - Camada externa composta por lipopolissacarídeos, lipopoliproteínas e fosfolipídeos. Há o espaço periplasmático - entre membrana citoplasmática e camada de peptideoglicana - que em alguma espécies contém B - lactamases (degrada penicilina) e B – lactâmicas; - Tem parede mais fina, porém mais complexa; - Possui endotoxinas (lipopolissacarídeos); - Deixa entrar agente diferenciador porque tem lipídeos. GRAM + não; CONSIDERAÇÕES IMPORTANTES • Algumas bactérias são pleomórficas em relação à coloração GRAM, logo se coram irregularmente. • A lisozima ataca paredes de bactérias GRAM positivas, havendo uma forma involutiva. A lisozima se encontra nas lágrimas, suor e saliva e consegue romper o esqueleto da peptideoglicana, permitindo que exista uma resistência natural do hospedeiro à infecção bacteriana. • Estreptococos produzem autolisinas que ficam na sua parede, permitindo a entrada do agente diferenciador. Com isso, a bactéria apresenta coloração GRAM negativa devido à forma de involução. • Propriedade tintorial: é qualificar a bactéria em GRAM positiva ou GRAM negativa. • Bactérias GRAM positivas podem se tornar GRAM negativas ao sofrer uma modificação em sua membrana. • Bactérias tratadas com lisozima perdem sua parede, mas se forem tratadas em um meio à mesma pressão osmótica que seu interior ficam arredondadas - esferoplastos e os protoplastos. • Bactérias GRAM negativas não pode se tornar GRAM positivas. • Forma L: são as GRAM negativas ou GRAM positivas que perdem suas paredes. • Bactérias GRAM positivas são mais susceptíveis à penicilina G do que as GRAM negativas. As proteínas porinas têm importante função na regulação do transporte de pequenas moléculas hidrofílicas para o interior da célula. Formam trímeros, funcionando como um canal inespecífico. COLORAÇÃO DE BACCILOS ÁLCOOL – ACIDO RESISTENTES (Ziehl Neilsen) 1. Mycobacterium: As Mycobacterium não se coram com GRAM, pois sua parede é diferente da parede de bactérias GRAM positivas e GRAM negativa. As paredes das Mycobacterium são grossas com grande quantidade de lipídeos - ácido micólico (60% da parede). Tal estrutura resulta em paredes impermeáveis. 2. Processo da coloração • Fucsina concentrada com aquecimento (mais ou menos 10 min): precisa aquecer, pois corante não entra facilmente por causa da parede grossa. • Álcool + ácido: agente diferenciador não entra nas Mycobactérias. Álcool-ácido é mais forte que álcool-acetona. • Contracoloração: azul de metileno (fraco). • Resultado: bactérias álcool resistentes ficam vermelhas e as outras azuis. • Esquema da parede das GRAM positivas e GRAM negativas: GRAM positivas: Cápsula Peptideoglicana /////////////////// membrana citoplasmática GRAM negativas: Camada externa (LPS) Peptideoglicana Espaço Peri plásmico //////////// membrana citoplasmática • LPS: é endotoxinas (é parte integral da célula, ao contrário das exotoxinas que são secretadas pela bactéria) sendo responsável por muitos dos sintomas das doenças (ex: choque, febre, etc.) • Parede da GRAM negativa (seqüência de cima para baixo): LPS (lipídeo - polissacarídeo) camada Camada bilipídica externa Proteínas lipo (acúmulo de enzimas hidrolíticas) Camada fina (2 a 8nm) de peptideoglicana • Diferenciação da GRAM negativa: o polissacarídeo. METODOS Foram apresentadas seis placas de petri com meios de cultura, nelas observou-se: PLACA 01 – Foi observado a presença de quatro tipos de colônias mistas, 1ª cor creme, 2ª amarelada, 3ª rugoide, 4ª mucoide. PLACA 02 – São mucoides, incolores de bordas regulares, cultura pura apresentando um tipo de microrganismo. PLACA 03 – Forma arredondadas e pequenas, bordas regulares, cultura pura apresentando um tipo de microrganismo. PLACA 04 – Placa semelhante a 3 tambem com forma arredondadas e pequenas, bordas regulares, cultura pura apresentando um tipo de microrganismo PLACA 05 – Colônias grandes, cultura pura, centro mais arredondado e amarelado. PLACA 06 – Colônias pequenas, de pigmentação amarela, cultura pura, semelhante à placa 1. Preparação da lâmina: Coloca-se uma gota de soro fisiológico na lâmina, aquece a alça microbiológica de platina, após ela se esfriar pega o meio de cultura (se a alça estiver quente mata o meio de cultura) e faz o esfregaço na lâmina, em seguida aquece um pouco a lâmina para fixar o esfregaço. Para corar: É necessário cobrir a placa com cristal violeta, aguarda 1 minuto, depois enxágua com água, em seguida cobre a placa novamente com lugol e aguarda mais 1 minuto, logo após enxágua com álcool acetona, aplica fuccina aguarda 30 segundos e enxágua com água. Visualização: Foram apresentadas seis placas de petri com meios de cultura nelas observou-se: Placa 01 Bastonetes rugoso gram + Placa 02 Bastonetes mucoide gram – Placa 03 Cocos arredondadas gram + RESULTADO Com a realização do processo de coloração de gram utilizando os corantes fucsina e cristal violeta, observaram-se as características de bactérias podendo ser classificadas em Gram+ e Gram-. CONCLUSÃO Ao termino deste experimento concluímos que o processo de coloração de gram é de suma importância para a classificação de bactérias, levando em consideração as paredes celulares e mediante seu resultado de coloração e visualização microscópica, classificá-las em Gram + ou Gram -. REFERENCIAS BIBLIOGRAFIAS