Guia de Interpretação para Contagem de Leveduras e Bolores

Guia de Interpretação para Contagem de Leveduras e Bolores

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Interpretação Guia de

3MTM PetrifilmTM Placa para Contagem de Leveduras e Bolores

3MTM PetrifilmTM Placa para Contagem de Leveduras e Bolores

Este guia apresenta resultados das placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Leveduras e Bolores. Para mais informações, contate o representante de produtos microbiológicos da 3M do Brasil Ltda.

A Placa 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Leveduras e Bolores (YM) é um meio de cultura pronto para uso que contém um agente geleificante solúvel em água fria, nutrientes e um corante indicador para dar contraste e facilitar a contagem.

Contagem Total = 20 Contagem de Leveduras = 16 Contagem de Bolores = 4

Esta Placa 3M™ Petrifilm™ YM contém colônias de leveduras e bolores.

Contagem de Leveduras e Bolores = 0

A figura 2 mostra uma Placa 3M™ Petrifilm™ YM sem leveduras e bolores.

Contagem Estimada de Bolores ~64

As colônias de bolores, na figura 5, estão começando a se aglomerar e sobrepor umas as outras na placa. Conte cada margem da colônia ou foco. A placa pode ser dividida em seções para facilitar a contagem. Neste exemplo, aproximadamente 1/4 da placa foi contada, e o número de colônias contado foi multiplicado por 4 para obter a contagem estimada na placa. A seção mostrada tem 16 bolores.

Contagem Estimada de Leveduras~INC (contagem atual > 104 )

A Placa 3M™ Petrifilm™ YM, na figura 4, contém colônias de leveduras incontáveis (INC). As colônias pequenas e azuis na borda da placa (realçadas na caixa) estão presentes na placa toda, embora menos visíveis.

Contagem Total Estimada ~500 Contagem Estimada de Leveduras ~480 Contagem de Bolores = 21

Quando o número de colônias é maior que 150, estime a contagem. Determine o número médio de colônias num quadrado (1cm2) e multiplique-o por 30 para obter a contagem total por placa. A área inoculada é de aproximadamente 30 cm2. A cor das colônias pode variar de pálida (como neste exemplo) a azul esverdeada.

As placas nas figuras 6a e 6b são da mesma amostra. A figura 6a é uma diluição 1:10 e apresenta colônias pequenas, pálidas e numerosas, tornando difícil a contagem. A figura 6b é uma diluição 1:100 e mostra como a diluição do produto, para obter uma contagem menor que 150 colônias, facilita a contagem. Como na maioria dos meios, num ambiente altamente competitivo (como a figura 6a), o crescimento de colônias típicas será inibido. Para amostras altamente contaminadas, como esta, diluições maiores são recomendadas para obter uma contagem mais precisa e maior crescimento de colônias típicas (como na figura 6b).

Contagem de Leveduras e Bolores = 0Contagem de Leveduras e Bolores = 0

As Placas 3M™ Petrifilm™ YM utilizam o corante indicador da fosfatase. Por essa razão, alguns produtos alimentícios que contêm fosfatase podem causar uma reação de cor azul na Placa 3M™ Petrifilm™ YM. Dois tipos de reações de cor são encontradas: uma coloração de fundo azul uniforme ou pontos azuis intensos. A figura 7 mostra uma coloração de fundo azul uniforme e a figura 8 mostra um ponto azul intenso, muitas vezes encontrado em condimentos e produtos granulados. A figura 8 também mostra partículas de alimentos que produzem fosfatase.

Para reduzir a reação da fosfatase, siga uma ou mais das técnicas a seguir: 1. Dilua a amostra: Diluições maiores da amostra irão minimizar a coloração azul de fundo ou reduzir o número de pontos azuis intensos.

do recipiente ou use saco para homogeneização com filtro a fim de evitar o plaqueamento de partículas.

2. Preparo da amostra: Misture a amostra e deixe sedimentar por 3 a 5 minutos antes de plaquear. Pipete a amostra da porção central

interpretação final.

3. Observe e anote: Observe as placas dentro de 24-36 horas de incubação e anote qualquer mudança de cor a fim de auxiliar na

Reação de Fosfatase

Contagem de Bolores ~INCContagem de Bolores = 64

Prepare a diluição da amostra. Pese ou pipete a amostra num recipiente estéril, como saco para homogeneização ou frasco de diluição.

Misture ou homogeneize a amostra utilizando métodos de rotina.

Refrigere os pacotes fechados a < 8ºC. Use antes da data de vencimento impressa na embalagem. Antes do uso, deixe os pacotes atingirem a temperatura ambiente para abri-los.

Para selar os pacotes abertos, dobre a extremidade e sele com fita adesiva.

Para prevenir contra a exposição à umidade, não refrigere os pacotes abertos. Mantenha os pacotes re-selados num lugar fresco e seco por até um mês. Evite expor as placas a uma temperatura > 25ºC e/ou umidade relativa > 50%.

Petrifilm Armazenamento

Preparo da Amostra 1

Para informações detalhadas sobre PRECAUÇÕES, REJEIÇÃO DE GARANTIAS/RECURSO LIMITADO, RESTRIÇÕES DE RESPONSABILIDADE DA 3M, ARMAZENAMENTO E DESCARTE E INSTRUÇÕES DE USO VEJA A BULA DO PRODUTO.

Adicione a quantidade adequada de um dos diluentes estéreis a seguir: tampão fosfato de Butterfield, água peptonada 0,1%, diluente salina peptonada (método ISO 6887-1), solução salina (0,85 – 0,90%), caldo letheen sem bissulfato ou água destilada.

Não use tampões contendo citrato, bissulfato ou tiossulfato; eles podem inibir o crescimento. Se o tampão citrato for indicado no procedimento padrão, substitua-o por um dos tampões listados acima, pré-aquecido a 40-45ºC.

Não é necessário ajustar o pH da amostra, contudo, amostras com pH ajustado podem ser usadas.

3MTM PetrifilmTM Instruções de Uso Placa para Contagem de Leveduras e Bolores

Incubação Interpretação

Incube as Placas com a face transparente para cima, em pilhas de até 20 placas a 20-25ºC por 3 e 5 dias. (Devido ao fato de que alguns bolores podem crescer rapidamente, pode ser interessante ler e contar as placas em 3 dias, pois pequenas colônias podem ser ocultadas pelos bolores maiores, crescidos em 5 dias. Se isto acontecer, a contagem com 3 dias pode ser usada; contudo, deve ser reportada como uma contagem estimada).

As Placas 3M™ Petrifilm™ podem ser contadas em um contador de colônias comum ou outro sistema de amplificação.

Coloque o difusor do Petrifilm™ Leveduras e Bolores no centro da placa.

Distribua a amostra pressionando delicadamente o centro do difusor.

Coloque a Placa 3M™ Petrifilm™ em uma superfície plana. Levante o filme superior.

Com a 3M™ Pipeta Eletrônica ou equivalente, posicionada perpendicularmente a Placa 3M™ Petrifilm™, coloque 1ml da amostra no centro do filme inferior.

Inoculação

789Desça o filme superior sobre a amostra.

Métodos Listados:

* Contagem de Leveduras e Bolores em Alimentos: Método Oficial AOAC 997.02

* Amostragem Ambiental: Placas para Contagem de Leveduras e Bolores Método MFLP-41A

* Produtos Alimentícios e Ingredientes: Placas para Contagem de Leveduras e Bolores Método MFHPB-32

• Estados Unidos • Canadá

Contagem de Leveduras = 43

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