Baixe relatório coloração gram e outras Provas em PDF para Biotecnologia, somente na Docsity! – Curso Técnico de Biotecnologia Atividade Laboratorial n.º1 Turma: Ano Letivo: 2011 Disciplina: Microbiologia Geral Profª: Tema: Coloração de Gram Amostras: Activia (Bifidobacterium animalis), Cana de Açúcar, Yakult, Placa Sem nome e com Água(Tanque de Peixes) Nome: AL3 - Página única • Sólido: pingou-se uma gota de água destilada na lâmina, colheu-se com a alça bacteriana uma porção da colonia bacteriana da placa de petri na superfície do Ágar e misturou-se com a gota de água na lâmina, até obter um esfregaço homogêneo; • Após fixa-se o esfregaço, passando a lâmina 3 vezes sobre a chama do bico de bunsen. Introdução: Proposta por C. Gram em 1884, esta técnica permit distinguir célul s bacterianas quanto à composição das suas paredes celulares, facilitando a observação morfológica das próprias células. Em termos físico-químicos, o processo baseia-se na reação de um corante alcalino com os ácidos da célula. Por adição de lugol (solução de iodo) forma-se um complexo que, quando se aplica o álcool, desaparece ou é retido, consoante a diferente sensibilidade das paredes celulares. Torna-se assim possível distinguir entre bactérias Gram positivas (Gram +) e Gram negativas (Gram -), consoante a cor final que as células tomam. Esta coloração é um dos critérios fundamentais usados em taxonomia bacteriana, pois esta diferença de comportamento é atribuída a diferenças na composição da parede celular. Procedime t da col ação para todos os étod s: • Cobriu-se o esfregaço co cristal violeta durante 1 minuto; • Lavou-se com água corrente (somente um fio de água) evitando incidir o jato diretamente sobre o esfregaço; • Cobriu-se com lugol durante 1 minuto; • Repetiu-se a lavagem; • Descorou-se com álcool/acetona(gotejou-se a solução até que não saia ais o cor nte); • Repetiu-se a lavagem; • Cobriu-se com fucsina durante 30 segundos; • Repetiu-se a lavagem; • Esperou-se a lâmina secar naturalmente ao ar livre. Objetivo Dem nstrar a importância da color ção de Gram estabelecer a di tinção e tre: • Bactérias Gram-positivas e Gra -ne ativas; • As morfologias cocos, bacilos; Arranjo bacterian s (estafilococos, estreptococos, etc.; L ved ras. Mat riais: - Lâminas,p acas de p tri, vidro de relógio, cadinho, pi tilo, isseta, béquer, água destilada, ól de imersa , frasco com álcool/arei , lç bacteriológic , microscópio óptico, bico de bunsen, balança analítica, capela, luvas. - Solução de cristal violeta, lugol, álcool/acetona, fucsina. - Activia(bifidobacterium animalis), caldo de cana, yakult, placa sem nome, placa do tanque de peixes. icrosc a: Ex minou-se a amost ao microscópi . C locou-se a lâm a com amostra co ada ao microscó i e foc lizo -se com objetiva 10X, logo em s guid , mudou-se p ra a objetiva 20X e focaliz u-se, após, mudou- e ara a bjetiva 50X e foc izou-se e antes de mudar par a última objetiva, ingou-se uma gota do ól o de imersão na lâmina contendo a amostra e mudou-se para a objetiva 100X e novamente focalizou-se. Analis ndo os re ult dos: - Activi (Bifidobact ium nimalis) - observou-se a presença de ocos, diplo oco e estaphylococus gr m-positivo ; - Yakult – Observou-se a res nça de bactérias g am-p sitivos; - Cald de cana – Observo -se a presenç de muitas l ve ura e b cil s gr -p sitiv s gram-negativ s; - Pl ca s m nom – Observou- pres nç de lev uras, bacilus gram-negativos e gram-positivos; - Placa com água (tanque peixes) – Observou-se a presença de bacilus gram-negativos. eparo S luções: A sol çõ s de Crist l V leta e Fucsina que utilizam s, j est vam prep r das. P eparação Lug l: - Iodo..................................................0,25 g; - Iodeto de P tá sio...........................0,50 g; - Água Destilada..................................75 ml; - Cadinho, balança analítica, pist lo, pisseta, vidro de relógio. Colocou-se o vidr de relógio na balança analítica e t rou-se, pesou-se os ingredientes sólidos (gramas) colocou-se no vidro de relógio, e seguida, colocou-se em um cadinho o ingredientes sólidos e triturou- se bem, juntou-se á ua destilada misturando os ingredientes. Preparação Álcool-Acetona: - Álcool etílico.....................................200 ml; - Acetona..............................................50 ml; - Béquer, Pipeta, capela; M diu-se s ingredient s líquidos na capela utilizando uma pipeta e colocou-se as soluções em um béquer, misturou-se bem. Concl s : A realização de testes básicos para identificação de bactérias, através do método de coloração de Gram, permitiu-se concluir q e existem diferenças significativas na composição da pare e celular de bactérias Gram po it va e Gram negativas.O mecanismo de reação de Gram demonstrou-se um método eficiente de coloração difer ncial, podendo-se, através do resultados btidos, diferenciar bactérias Gram positivas de Gram negativas, atu ndo como ferramenta auxiliar, na identificação de bactérias fitopatogênicas.