anvisa meios de cultura

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Descrição dos Meios de

Cultura Empregados

Microbiológicos

nos Exames Módulo IV

1. Introdução1
Procedimentos gerais1
2. Meios de cultura para transporte e conservação2
Cary Blair2
Salina Tamponada2
Meio Stuart3
Ágar nutriente4
3. Meios para crescimento e isolamento6
Ágar Chocolate6
Ágar Thayer-Martin Chocolate7
Ágar Salmonella-Shigella (s)7
Caldo Selenito8
Caldo Tetrationato9
Caldo Tioglicolato com indicador10
Caldo Tioglicolato sem indicador1
Ágar Mac Conkey12
Ágar Sangue13
Ágar CLED – cystine lactose electrolyte deficient14
Caldo BHI – brain heart infusion15
Löwenstein Jensen16
Meio bifásico: Löwenstein e Middlebrook18
Ágar Mycosel19
Ágar Sabouraud20
4. Meios comerciais para provas de identificação2
Base de nitrogênio para leveduras – Yeast Nitrogen Base2
Ágar Citrato Simmons23
Ágar Bílis-Esculina24
Ágar Sangue - CAMP25
Caldo base de Moeller26
Ágar Dnase28
Ágar Esculina30
Ágar Fenilalanina31
CTA – Cystine Tryticase Agar32
Caldo Triptona e SIM3
Meio Caldo Triptona34
Caldo Malonato35
Caldo Nitrato36
Meio base para oxidação e fermentação - OF38
Ágar TSI – triplo açúcar ferro40
Ágar base uréia (christensen)41
5. Fórmulas e produtos para provas de identificação43
Para prova de catalase43
Para prova de coagulase43
Para prova de gelatinase45
Para prova de lecitinase46
Para prova de oxidase47
Para fermentação de carboidratos48
Para a prova de hidrólise49
Para crescimento a 42 e 44°c50
Para teste de motilidade51
Para prova de tolerância ao NaCl 6,5%5
6. Discos para identificação57
Bacitracina57
Novobiocina57
Optoquina58
7. Meios para teste de sensibilidade aos antimicrobianos60
HTM – haemophilus test médium60
Ágar Mueller Hinton61
Ágar Mueller Hinton Sangue62

ÍNDICE 8. Referências bibliográficas ...............................................................................................64

Mod IV - 1

1. INTRODUÇÃO

Os meios comerciais devem ser hidratados em pequena quantidade de água até que todo o meio fique úmido e só depois deve-se acrescentar o restante da água.

Os meios preparados não comerciais, devem ser pesados separadamente em papel manteiga ou papel alumínio e adicionados em um único frasco (normalmente em béquer), hidratar em pequena quantidade de água até que todo o meio fique úmido e só depois deve-se acrescentar o restante da água.

Sempre que for necessário levar o meio para fundir, usar vidro Pyrex, aquecer sobre a tela de amianto ou similar e tripé, no bico de Bunsen.

Usar sempre luvas térmicas apropriadas para laboratório para manipular vidrarias quentes;

Sempre que for usado o termo "esterilizar em autoclave", o tempo de esterilização é de 15 minutos e a temperatura de 121ºC.

Sempre que for usado o termo "esterilizar por filtração", usar o filtro com porosidade de 0,2 micra, recomendado para partículas bacterianas.

Quando distribuir o meio antes de autoclavar, os tubos não precisam estar esterilizados;

Quando distribuir o meio após a autoclavação, os tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias ou materiais auxiliares obrigatoriamente devem ser estéreis.

Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas, para que a esterilização seja por igual em todo o conteúdo dos tubos - tampas fechadas não permitem a entrada do vapor.

Para todos os meios confeccionados, colocar no mínimo 10% do lote preparado na estufa 35 ± 1°C por 24 horas para o controle de esterilizade.

Não deve haver mudança de cor nem crescimento de qualquer colônia.

Para o controle de crescimento, sempre que possível usar cepas ATCC , que são cepas de referências de origem e padrão definido de provas para a sua caracterização.

Se não for possível o uso de cepas ATCC , usar cepas 100% positivas para os controles de qualidade de crescimento realizados.

Evitar usar meios vencidos (liofilizados e prontos para uso); se usar, certificar-se com o controle de crescimento de que realmente está funcionando.

Não usar meios prontos para uso em tubos ou placas que estejam ressecados.

Observar com atenção para as instruções de alguns inóculos que são específicos para alguns meios de cultura.

Recomenda-se o uso de tubos com tampa de rosca, pois evitam o ressecamento rápido do meio (tamanho dos tubos utilizados geralmente são de 1 por 100 m).

As placas de Petri são de 50, 90 ou 150 m de diâmetro.

Todos os meios confeccionados devem ser devidamente identificados com o nome, data de fabricação, data de validade e tipo de armazenamento.

Todos os meios de placa devem ser embalados em filme plástico PVC transparente para evitar o ressecamento.

Evitar o uso de sacos plásticos para embalar as placas, pois a água de condensação formada facilita a proliferação de fungos; para meios de cultura em tubos, colocar em sacos plásticos, procurando tirar o excesso de ar.

Mod IV - 2

2. MEIOS DE CULTURA PARA TRANSPORTE E CONSERVAÇÃO

patogênicos e outros coliformes fecais sobrevivem bem neste meio

meio de Cary Blair foi formulado à partir do meio de Stuart, uma vez que microrganismos

A carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação de microrganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles.

O que difere este meio do meio de Stuart, é a adição de uma solução salina balanceada de tampão fosfato inorgânico e omitindo da fórmula o azul de metileno.

UTILIDADE Transporte de material fecal e conseqüente conservação dos microrganismos.

FÓRMULA/ PRODUTO Meios comercial: Meio de transporte Cary Blair.

Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante; Fundir completamente;

Distribuir 7 ml por tubo;

Esterilizar em autoclave;

Após retirar da autoclave, manter os tubos em posição vertical para solidificar.

CONTROLE DE QUALIDADE Crescimento bom (com 0, 24 e 48 horas de crescimento): Shigella flexneri ATCC 12022.

CONSERVAÇÃO E VALIDADE Conservar de 4 a 10°C de 6 a 8 semanas.

Introduzir um "swab" estéril de madeira nas fezes recém coletadas; Após a coleta, introduzir imediatamente o "swab" no meio de cultura e quebrar a ponta da haste, de modo que a parte que contém o algodão fique no meio de cultura; Fechar o tubo;

Manter em temperatura ambiente até o momento de semear nos meios seletivos adequados.

Cor original do meio: Branco opalescente. Como este é um meio de transporte, não há evidência de crescimento bacteriano.

Não deixar o meio com a tampa aberta ou semi aberta após a semeadura. Não semear fezes coletadas com mais de 6 horas.

Mod IV - 3

PRINCÍPIO Meio líquido tamponado que mantém a bactéria viável.

UTILIDADE Meio de transporte de fezes.

NaCl4,2 g

Fórmula: Fosfato dipotássico anidro 3,1 g Glicerina bidestilada 300 ml Água destilada 700 ml

Distribuir 10 ml em cada tubo de 16 x 160 m; Esterilizar em autoclave.

CONTROLE DE QUALIDADE Shigella flexneri ATCC 12022

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