Colesterol liquiform

Colesterol liquiform

(Parte 1 de 4)

Finalidade . Princípio .

Características do Sistema .

Sistema enzimático para a determinação do colesterol totalemamostrasdesoro,porreaçãodepontofinal.

O colesterol total é determinado de acordo com as seguintesreações:

Colesterol

Ésteresdocolesterol Colesterol+Ácidosgraxos Esterase

Colesterol Colesterol+O Colest-4-en-ona+H O

Oxidase

Os ésteres de colesterol são hidrolisados pela colesterol esterase a colesterol livre e ácidos graxos. O colesterol livre é oxidado pela colesterol oxidase a colest-4-en-ona e peróxido de hidrogênio. Na presença de peroxidase e peróxido de hidrogênio, o fenol e a 4-aminoantipirina são oxidados formando a antipirilquinonimina que tem absortividade máxima em500nm.

A intensidade da cor vermelha formada na reação final é diretamente proporcionalàconcentraçãodocolesterolnaamostra.

Os valores elevados do colesterol, principalmente o colesterol ligado às lipoproteínas de baixa densidade, são um dos mais importantes fatores de risco para o desenvolvimento da doença arterial coronariana. O National Cholesterol Education Program (NCEP) recomenda que os sistemas de medição do colesterol apresentem características de desempenho capazes de atingir os requisitos de exatidão e precisão necessários para que os resultados tenhamutilidademédica.

Os dados de exatidão, repetitividade e reprodutibilidade obtidos com o sistema Colesterol Liquiform demonstram que o método é capaz de fornecer resultados que superam as exigências do NCEP, fazendo com que possa ser considerado como bastante seguro para a medição confiável do colesterol total nos níveis de decisão mais importantes. Adicionalmente, a comparação entre as imprecisões encontradas na repetitividadeenareprodutibilidadedemonstraqueosistemademedição é bastante robusto nas regiões de concentrações significativas para uso clínico,indicandoumdesempenhoestávelnodiaadia.

O sistema é composto de um único reagente pronto para uso, com estabilidade que garante desempenho consistente em sua forma líquida originalemanutençãodascondiçõesótimasdareação.

[Somenteparausodiagnósticoinvitro.]

Colesterol Liquiform possui um sistema clarificador de alta eficiência que elimina as interferências positivas produzidas por valores de triglicérides até2600mg/dL.

O sistema é facilmente aplicável em analisadores automáticos e semiautomáticos capazes de medir uma reação de ponto final em 500 nm e pode ser usado para medição do colesterol HDL após precipitação seletivadasLDLeVLDL.

Enzimático-Trinder.

Contém tampão 50 mmol/L, pH 7,0; fenol 24 mmol/L; colato de sódio 500 mol/L; azida sódica 15 mmol/L; 4-aminoantipirina 500 mol/L; colesterol esterase 250 U/L, colesterol oxidase 250 U/L e peroxidase 1000U/L.

Para preservar o desempenho, o reagente deve permanecer fora da geladeira somente o tempo necessário para se obter o volume a ser utilizado. Evitar exposição à luz solar direta.

Contém azida sódica 15 mmol/L. Após o manuseio sugere-se armazenar bemvedadoparaevitarevaporação.

Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Durante o manuseio, os reagentes estão sujeitos à contaminações de natureza química e microbiana que podem provocar redução da estabilidade.

Não utilizar o Reagente 1 quando sua absorbância, medida contra a água em 500 nm, for igual ou maior que 0,300 ou quando mostrar-se turvo ou comsinaisdecontaminação.

Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação do reagente. O Reagente 1 e o Padrão contém azida sódica que é toxica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingestão e no caso de contato com os olhos deve-se lavar imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulações de chumbo e cobre. Portanto,utilizargrandesvolumesdeáguaparadescartaroreagente.

Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Durante o manuseio, os reagentes estão sujeitos à contaminações de natureza química e microbiana que podem provocar redução da estabilidade.

Metodologia. Reagentes

COLESTEROL Liquiform

Instruções de Uso Ref.:76

MS 10009010068

01 Português - Ref.: 76 Precauções e cuidados especiais

Materialnecessárioenãofornecido

Influências Pré-analíticas .

Banho-mariamantidoàtemperaturaconstante(37°C).

Fotômetro capaz de medir, com exatidão, a absorbância entre 490 e 510nm.

Pipetasparamediramostrasereagente.

Cronômetro.

A postura durante a colheita da amostra deve ser padronizada porque pode ter efeitos significativos nos resultados. Se as amostras são obtidas com o paciente na posição sentada, deve-se padronizar para que o indivíduo esteja sentado durante 15minutosenãomaisque30minutos.

Um garroteamento maior que 1 minuto produz hemoconcentração, o que podeaumentarosvaloresdocolesterolem5,0%após2minutose10,0a 15,0% após 5 minutos. Portanto, é muito importante obter a amostra de sangue após liberar o torniquete devendo-se padronizar todo o procedimentodacolheita.

A variação biológica do colesterol, decorrente da variação também biológica das lipoproteínas transportadoras do colesterol, é observada quando a dosagem do colesterol é repetida em um mesmo laboratório no espaço mínimo de uma semana. Ela ocorre independentemente do erro analítico e pode variar entre 1,7 e 1,6% com uma média de 6,1% devido, principalmente, à variação biológica da LDL que é a principal lipoproteína transportadoradecolesterol.

Níveis elevados de ascorbato (vitamina C) produzem interferências negativas por competição com o cromogênio na reação da peroxidase. Se houver suspeita da presença de ácido ascórbico deixar o soro em repouso durante 90 minutos antes de iniciar a dosagem para minimizar a açãodointerferente.

Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) que estabeleça procedimentos adequados para colheita, preparação e armazenamentodaamostra.Enfatizamosqueoserrosdevidosàamostra podemsermuitomaioresqueoserrosocorridosduranteoprocedimento analítico.

De modo geral, a amostra de sangue pode ser obtida com ou sem jejum, mas é altamente recomendável que todos os ensaios dos lípides sanguíneos, incluindo o colesterol, sejam realizados em amostras colhidas em jejum. As vantagens da utilização de amostras colhidas em jejum são decorrentes da padronização da colheita, pois permitem a realização da determinação de outros lípides que requerem o jejum e minimizam a interferência da lipemia pós prandial que está freqüentementepresenteemamostrasobtidassemojejum.

Usar soro. Anticoagulantes como citrato, oxalato ou EDTA produzem resultados falsamente diminuídos. O analito é estável 7 dias entre 2-8° C e 6 meses a 20 °C negativos . Homogeneizar bem as amostras lipêmicas antes de iniciar a dosagem. Não utilizar amostras fortemente hemolisadas.

Comoovolumedeamostraépequeno,deve-sepipetarcomcuidadopara minimizaraimprecisãodosistemademedição.

Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las, deve-se seguir as normasestabelecidasparabiossegurança.

Para descartar os reagentes e o material biológico, sugerimos aplicar as normaslocais,estaduaisoufederaisdeproteçãoambiental.

Valores de bilirrubina até 5 mg/dL, hemoglobina até 180 mg/dL e triglicérides até 2600 mg/dL não produzem interferências significativas. Valoresdebilirrubinaentre5e38mg/dLproduzemresultadosfalsamente diminuídosproporcionaisàconcentraçãodabilirrubina.

Para avaliar a concentração aproximada da hemoglobina em uma amostra hemolisada pode-se proceder do seguinte modo: Diluir 0,05 mL da amostra em 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) e medir a absorbância em 405 ou 415 nm acertando o zero com água deionizada oudestilada.

Hemoglobina(mg/dL) Absorbância x 601 Hemoglobina(mg/dL) Absorbância x 467

Ver Tomar3tubosdeensaioeprocedercomoaseguir:

Misturareincubarembanho-mariaa37°Cdurante10minutos.Onívelde água no banho deve ser superior ao nível de reagentes nos tubos de ensaio.Determinarasabsorbânciasdotesteepadrãoem500nmoufiltro verde (490 a 510), acertando o zero com o branco. A cor é estável por 60 minutos.

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