identificação enterobacterias

identificação enterobacterias

Identificação de Enterobactérias.

índice

Família Enterobacteriaceae Patogenia Isolamento e identificação de enterobactérias Aspecto das colônias Identificação Bioquímica ( cultura pura) Reação de VM e VP Escherichia coli Salmonella Shigella Klebsiella Enterobacter Serratia Citrobacter Proteus - Providencia - Morganella Fluxograma BGN OXIDASE Considerações finais

Introdução Definição

•Bacilos Gram negativos •AAF / Fermentadores da glicose

•Oxidase negativa e catalase +

•Móveis / imóveis

•Cresce em meios comuns

Habitat Plantas, solo, água, intestino do homem e animais

Família Enterobacteriaceae

Introdução

Nomenclatura e Classificação

•Moleculares novas espécies

•Métodos Fenotípicos reclassificação

Classificação •Gêneros ( 42)

•Espécies ( centenas )

•biotipos e sorotipos Complexos

Família Enterobacteriaceae

Classificação - patogenia

- Enteropatógenos - Infecções nosocomiais - espécies importantes

- Outras espécies - raras em material clínico isoladas em : meio ambiente plantas animais

Identificação de Enterobactérias

Enterobactérias - principal componente da flora intestinal normal do homem.

• Infecções -intestinal, feridas e trato urinário • Abcessos, pneumonia, meningites

• Infecções nosocomiais

Família Enterobacteriaceae Patogenia

Infecções intestinais

Características •normalmente na comunidade

•DTA – doença transmitida por alimento

•surtos / casos isolados

•hospitalar

Patógenos entéricos clássicos

Salmonella spp Shigella spp E.coli - categorias diarreiogênicas Yersinia enterocolitica

Família Enterobacteriaceae Patogenia

Infecções extra-intestinais

Comunidade Hospitalar

•Qualquer espécie •Fatores de risco:

Paciente Veículos de transmissão Alimentos contaminados

Espécies mais comuns

Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Proteus mirabilis Enterobacter spp Salmonella ( sorotipos) Serratia marcescens Citrobacter spp Providencia spp

Família Enterobacteriaceae Patogenia

ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS Família Enterobacteriaceae

Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN ( 18 a 24h 1 m de diâmetro).

1- Exame macroscópico da cultura: •Aspecto morfológico das colônias ( AS, MC,S, TSA )

•Tempo de crescimento e tamanho da colônia

•Observar pureza da cultura

2-Exame microscópico da cultura: •Gram: tamanho, morfologia, reação tintorial, etc

Aspecto das colônias Agar MacConkey

Aspecto das colônias Salmonella. E.cloacae E.coli

E. coli E. coli

Aspecto das colônias E. cloacae

Família Enterobacteriaceae Identificação Bioquímica ( cultura pura)

•IAL (Pessoa e Silva)

Meios presuntivos •EPM-MILI

Provas complementares:

Fermentação de açúcares LDC- ODC - ADH CiSi

Pesquisa de enzimas DNase gelatinase,lipase, NAR, ONPGase

Identificação Bioquímica

Gram Oxidase VM e VP

Série completa - 47 testes Família Enterobacteriaceae

Reação de VM e VP Família Enterobacteriaceae

•Enterobacter •Klebsiella

Maioria das espécies dos outros Gêneros •Salmonella

•Shigella

•Morganella

•Providencia

•Citrobacter

Enterobactérias VP+ Enterobactérias VP -

Citrato de Simmons Escherichia coli

*H2S- TDA- indol+ LDC+/- Motilidade+/- lac+ CISI -

K.oxytoca ( LDC+/ motil.-CiSi+)

Diagnóstico Diferencial

Citrobacter amalonaticus e C. diversus ( LDC-/motil.+CiSi+)

Aeromonas

Marcadores Epidemiológicos

Infec. Intestinais

Sorotipagem Fatores de virulência

Infec. Extra-intestinais

Sorotipagem Met. moleculares

Prova

Salmonella

Glicose+/gás v sac -

TDA - indol - LDC + Mov. +

CiSi+ Lac -

Diagnóstico diferencial

Citrobacter spp ( H2S + ) Proteus glicerol

Marcadores Sorotipagem

Fagotipagem Moleculares

Prova de Fermentação

Shigella

Lactose Ci Christ. Acetato Trab.

Marcadores Sorotipagem Met.moleculares

Glic.+ /gás - sac - urease - TDA -

H2S indol v

LDC - Mov. -

CiSi - Lac -

Diagnóstico diferencial

Citrato Sódio

Klebsiella

Enterobacter ( LDC+ / Mov.-)

ADH ODC Fermentação

Marcadores Sorotipagem Met. moleculares

Diagnóstico diferencial

Lac+ CiSi +

Enterobacter

Motilidade

DNase Fermentação

Enterobacter Klebsiella Serratia

E.cloacae

Marcadores Sorotipagem Met. moleculares

Diagnóstico diferencial Lac+

Serratia

Espécies de Serratia

LDC,ODC, malonato, fermentação , pigmento

Marcadores: Sorotipagem Met.moleculares

Glic.+ / gás- sac. - urease - indol - LDC + Mov. +

CiSi + Lac -

DNase +

Gelatinase + Lipase +

Citrobacter

Glic.+ / gás- sac =V urease -

H2S = V TDA - indol = V LDC - Mov. +

CiSi + Lac +

Espécies de Citrobacter

ODC, indol, H2S malonato fermentação

Glic.+/ gás - sac. - urease + TDA +

H2S = V indol = V

LDC - Mov. +

CiSi + Lac +

Proteus Providencia

Espécies H2S + BGN NF

Swarming

TDA, H2S, ODC, gelatinase, fermentação

Proteus - Providencia - Morganella Diagnóstico diferencial

Fluxograma

BGN BGN Oxidase Oxidase Lac + Lac -

E.coli Enterobacter Klebsiella Kluyvera Citrobacter

Shigella Salmonella Serratia Proteus Providencia Morganella

Ágar Mac Conkey Ágar Mac Conkey IAL IAL IAL IAL

Cit. Simmons Cit. Simmons Cit. Simmons Cit. Simmons

Enterobacter Klebsiella Kluyvera Citrobacter

Enterobacter Klebsiella Kluyvera Citrobacter

- E.coli E.coli

Salmonella Serratia Proteus/Prov.(V)

Salmonella Serratia Proteus/Prov.(V)

- Shigella

Morganella Shigella

Enterobactérias em microbiologia clínica Poucas espécies

Espécies incomuns , novas espécies, espécies atípicas podem ocorrer (isoladas de material clínico, ambiente, plantas e animais)

• Tratar-se de uma espécie rara • Cepa contaminada

• Uma ou mais testes não adequados na identificação ( turvação)

• Manipulação errada ( concentração do inóculo)

• Composição e quantidade do meio ( substrato presente)

• Controle de Q

O que fazer?

Checar tudo: • Pureza da cultura

• Repetir todos os testes no mesmo sistema ou utilizandoos

meios anteriormente utilizados

•Repetir todos os testes em outro sistema deidentificação ou

utilizar partidas diferentes do meio.

•Encaminhar para laboratórios de referência

Considerações finais

Importância da caracterização das espécies

•Evitar falsos surtos •Não identificação do surto

•Atenção para cepas atípicas

•Atenção para espécies raras

•Atenção para pureza das culturas

Comentários