DATY Meios de Cultura Empregados nos Exames Microbiológicos ANVISA

DATY Meios de Cultura Empregados nos Exames Microbiológicos ANVISA

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Recomendações

  • Não usar sangue de carneiro vencido, pois o meio fica hemolisado ou com cor muito escura, dificultando o estudo de hemólise;

  • Não usar sangue humano, pois alguns microrganismos não apresentam hemólise;

  • Não adicionar o sangue na base do meio quente, pois as hemácias rompem-se, dificultando o estude de hemólise;

Por ser um meio rico, o crescimento a partir de materiais biológicos em geral costuma ser abundante, sempre que necessário, isolar a colônia em estudo para os procedimentos de identificação, para não correr o risco de trabalhar com cepas misturadas.

ÁGAR CLED – Cystine Lactose Electrolyte Deficient

Princípio

  • Usado para isolamento e quantificação de microrganismos presentes em amostras urina. A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de Proteus.

Utilidade

  • Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras.

Fórmula / Produto

  • Meio comercial: Ágar Cled.

Procedimentos

  • Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante;

  • Esterilizar em autoclave;

  • Resfriar à +/- 50°C e distribuir de 20 a 25 ml em placas de Petri 90 mm estéreis;

  • Deixar em temperatura ambiente até resfriar.

Controle de qualidade

  • Positivo:

  • Lactose positiva: Escherichia coli ATCC 25922: crescimento moderado a denso, colônias médias ou grandes amareladas, após 48 horas de incubação.

  • Lactose negativa: Proteus vulgaris ATCC 8427: crescimento moderado a denso, colônias azuis translúcidas.

  • Negativo: ausência de crescimento

Inoculação

  • Verificar técnica de semeadura quantitativa.

Interpretação

  • Cor original do meio: azul claro.

  • Colônias lactose positiva: cor amarela.

  • Colônias lactose negativa: cor azul.

Características de crescimento:

  • Escherichia coli: colônias opacas, amarelas com ligeira cor amarelo escuro no centro, com cerca de 1,25 mm de diâmetro, as não fermentadoras de lactose colônias azuis

  • Espécies de Klebsiella: colônias muito mucosas, cor variável de amarelo a branco azulado

  • Espécies de Proteus: colônias azul translúcidas, geralmente menor que E.coli

  • Espécies de Salmonella: colônias planas, cor azul

  • Enterococcus faecalis: colônias amarelas, com cerca de 0,5 mm de diâmetro

  • Staphylococcus aureus: colônias amarelas, com cerca de 0,75 mm de diâmetro

  • Staphylococcus coagulase negativa: colônias amarelo palha e brancas

  • Corynebacterium: colônias pequenas e cinza

  • Lactobacilos: colônias pequenas e com superfície rugosa

  • Pseudomonas aeruginosa: colônias verdes, com superfície prateada e periferia rugosa

Conservação e validade

  • Conservar embalado de 4 a 8°C por até 3 meses.

Recomendações

  • Organismos que fermentam lactose baixam o pH e mudam a cor do meio de verde para amarelo, podendo assim verificar se o microrganismo é lactose negativa ou positiva;

  • Espécies de Shigella não crescem em meios deficientes em eletrólitos.

CALDO BHI – BRAIN HEART INFUSION

Princípio

  • É um meio derivado de nutrientes de cérebro e coração, peptona e dextrose.

  • A peptona e a infusão são fontes de nitrogênio, carbono, enxofre e vitaminas.

  • A dextose é um carboidrato que os microrganismos utilizam para fermentação.

Utilidade

  • Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactérias, não fermentadores, leveduras e fungos.

  • Pode ser utilizado na preparação do inóculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos, para realização de teste de coagulase em tubo, para teste de crescimento bacteriano a 42 e 44°C e para teste de motilidade em lâmina.

Fórmula / Produto

  • Meio comercial: Caldo BHI (infusão de cérebro e coração).

Procedimentos

  • Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante;

  • Distribuir 3,0 ml em tubos com tampa de rosca;

  • Esterilizar em autoclave;

  • Retirar os tubos da autoclave e deixar esfriar em temperatura ambiente.

Controle de qualidade

  • Positivo: Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 e Candida albicans ATCC 10231.

  • Negativo: meio sem inocular.

Inoculação

  • Com o auxílio de uma alça ou fio bacteriológico, inocular a colônia ou o material a ser testado -realizar o teste com colônias puras de 18 a 24 horas;

  • Incubar a 35°C ±2 por 24 a 48 horas;

  • Para isolamento de fungos incubar por até 5 dias.

Interpretação

  • Cor original do meio: amarelo claro, límpido.

  • Positivo: presença de turvação = crescimento bacteriano.

  • Negativo: ausência de turvação.

Conservação e validade

  • Conservar de 4 a 10°C por 6 meses.

Recomendações

  • Para cultivo de anaeróbios, acrescentar 0,1% de ágar.

  • Para crescimento de Haemophilus e outros fastidiosos é necessário adição de suplementos a base de L-cisteína, NAD (fator V) e hemina (fator X).

LÖWENSTEIN JENSEN

Princípio

  • A base do meio é constituída por ovos integrais, o que permite amplo crescimento das micobactérias e o crescimento é satisfatório para o teste de niacina (que é positivo para Mycobacterium tuberculosis).

Utilidade

  • Isolamento primário das micobactérias.

Fórmula / Produto

  • Meio comercial: Meio TB para Bacilos de Koch Seg. Löwenstein Jensen ou Löwenstein Medium Base

  • Ovos de galinha frescos

Meio base - fórmula:

Fosfato monopotássico 1,2 g

Sulfato de magnésio 0,12 g

Citrato de magnésio 0,3 g

L-asparagina 1,8 g

Fécula de batata 15,0 g

Glicerol 6,0 ml

Ovos totais 500 ml

Solução de Verde de malaquita a 2% 10 ml

Solução de Verde de malaquita à 2% - Fórmula:

Verde de malaquita 2 g

Água destilada 100 ml

Procedimentos

Preparação dos ovos:

  • Escovar os ovos, um a um, com escova de cerdas macias;

  • Deixar os ovos submersos em água e detergente comum, durante 30 minutos;

  • Enxaguar com água corrente cuidadosamente um a um;

  • Deixar os ovos submersos em álcool etílico a 70% durante 30 minutos;

  • Retirar os ovos cuidadosamente e secar com pano estéril;

  • Reservar os ovos.

Solução de Verde de malaquita a 2%:

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