Biologia Molecular Aplicada a Biotecnologia.parte 2

Biologia Molecular Aplicada a Biotecnologia.parte 2

(Parte 1 de 3)

Tecnologia do DNA

Recombinante e Avanços da

Biotecnologia

Pablo Ivan Pereira Ramos pablor@ufba.br

Minicurso: Biologia Molecular & Biotecnologia Tecnologia do DNA recombinante

•O que é?

•Técnicas de clonagem e expressão de genesEnzimas de restriçãoVetores •Aplicações Projetos GenomaProdução de fármacos

Genômicae depois?

Tecnologia do DNA recombinante

“(...) conjunto de técnicas para localizar, analisar, alterar, estudar e recombinar segmentos de DNA.” Pierce (2004)

Tecnologia do DNA recombinante Tecnologia do DNA recombinante

Tecnologia do DNA recombinante Quimera

rDNA

Tecnologia do DNA recombinante Etapas da clonagem gênica

Tecnologia do DNA recombinante

+ Tecnologia do DNA recombinante

Como inserir o segmento de interesse no genoma do vetor?

Tecnologia do DNA recombinante

•Estudos com bacteriófagos nos deram a resposta... vírus que infectam bactérias

•Estratégia de defesa Enzimas de restrição ou endonucleases de restrição:

Tecnologia do DNA recombinante

Daniel Nathans, Hamilton Smith, W. Arber

Tecnologia do DNA recombinante

EcoRI

•Enzimas de restrição ou endonucleasesde restrição:

Tecnologia do DNA recombinante

- + + EcoRI

•Mas como reconhecer o DNA do bacteriófago sem atacar seu próprio material genético?

Tecnologia do DNA recombinante

O DNA da bactéria é metiladoem sítios específicos, e o do vírus não!

Tecnologia do DNA recombinante CH3

•As enzimas de restrição reconhecem seqüências específicas...

Tecnologia do DNA recombinante

Palíndromos

SOS ame a ema socorram-me subi no ônibus em marrocos salta o atlas ...

Tecnologia do DNA recombinante

Tecnologia do DNA recombinante As enzimas de restrição fazem dois tipos de cortes...

1. Pontas retas

2. Pontas adesivas

Tecnologia do DNA recombinante As enzimas de restrição fazem dois tipos de cortes...

1. Pontas retas2. Pontas adesivas

•Mas as pontas adesivas se associam apenas temporariamente

Tecnologia do DNA recombinante Tecnologia do DNA recombinante

•A DNA ligase, então, promove uma ligação permanente...

Tecnologia do DNA recombinante Etapas da clonagem gênica

Tecnologia do DNA recombinante

Enzimas de restrição + DNA ligases nos permitem clivar e unir o DNA de organismos diferentes!

•Estratégias de clonagem: Tecnologia do DNA recombinante

-necessário sítio de restrição (=plasmídio) flanqueando a seqüência a ser clonada

•Estratégias de clonagem: Tecnologia do DNA recombinante

-a cauda poli(A) pode interferir na função do DNA clonado; -inativa o sítio de restrição original, impedindo seu uso

•Estratégias de clonagem: Tecnologia do DNA recombinante

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