Leis da espectrofotometria

Leis da espectrofotometria

LEIS DA ESPECTROFOTOMETRIA

ESPECTRO DE LUZ

  • A luz, dependendo de seu comprimento de onda, pode ser invisível ou visível aos nossos olhos.

ESPECTROFOTOMETRIA

  • É uma medida da quantidade de energia absorvida por uma solução;

  • Como o objetivo da análise bioquímica é a pesquisa da concentração de uma substância, em um determinada solução e,

  • Essa concentração é proporcional à quantidade de energia absorvida...

  • Isso obriga os analistas a conhecerem:

OS EQUIPAMENTOS

  • Os aparelhos que medem essa quantidade de energia absorvida e que têm aplicação no laboratório de Bioquímica Clínica são:

    • FOTOCOLORÍMETRO
    • ESPECTROFOTÔMERO

FOTOCOLORÍMETRO

  • CONSTITUÍDO POR:

    • Lâmpada ‘tungstênio’ – emite luz em diversos comprimentos de onda
    • Monocromador – ‘filtro’ - serve para isolar uma região do espectro de luz
    • Cubeta – ‘onde é colocada a amosta’
    • Detector – Detecta a luz absorvida
    • Medidor – serve para medir a quantidade de luz absorvida pela amostra

FILTROS

FILTROS

  • Os FOTOCOLORÍMETROS selecionam uma faixa do espectro, logo são menos sensíveis;

  • Os ESPECTROFOTÔMETROS selecionam um comprimento de onda específico, logo são mais sensíveis;

ESPECTROFOTÔMETRO

  • CONSTITUÍDO POR:

    • Lâmpada ‘Deutério’ – emite luz em diversos comprimentos de onda
    • Monocromador – ‘Prisma ou Grade de difração’ - serve para isolar um comprimento de onda desejado do espectro de luz;
    • Cubeta – ‘onde é colocada a amosta’
    • Detector – Detecta a luz absorvida
    • Medidor – serve para medir a quantidade de luz absorvida pela amostra;

MEDIDA DA ABSORBÂNCIA

LEI DE LAMBERT - BEER

  • “Há uma correlação direta entre a ABSORÂNCIA (A) e a concentração de determinada substância, num dado comprimento de onda, desde que o caminho óptico e a espessura da solução sejam constantes”

  • Entretanto, torna-se necessária uma operação destinada a eliminar a luz REFLETIDA, a TURBIDEZ da amostra e outras interferências.

OPERAÇÃO DE ZERAGEM

  • Com o BRANCO no compartimento da amostra, a absorbância dada pelo aparelho é ajustada para ZERO.

  • Com isso, as interferências causadas pelos reagentes ficam, em tese, EXCLUÍDAS,

  • Em seguida, faz-se a leitura da ABS da amostra verdadeira cuja intensidade de cor é devida a substância a ser analisada.

Comentários