Aula 9 - Técnicas Imunológicas

Aula 9 - Técnicas Imunológicas

(Parte 1 de 4)

A grandemaioriados testes imunológicos

se baseiano princípiodaInteração Antígeno-Anticorpo

•Reação de precipitação •Reação de aglutinação

•Radioimunoensaio (RIA)

• Imunofluorescência/Imunohistoquímica

•Western Blotting

•Citometriade Fluxo

–Forçasde Van derWaal (forçafraca, nuvemde elétrons)

OBS-Reações Reversíveis

Interação Ag-Ac (ligação não covalente)

– Ligações Eletrostáticas (grupos iônicos) –Pontes de Hidrogênio(proximidade)

– Ligações Hidrofóbicas (moléculas polares, H20)

Afinidade= ∑das forçasde atraçãoe repulsão

Ac Ag

Alta Afinidade Ac

Baixa Afinidade

Afinidade

•Quanto maior a afinidade do anticorpo pelo antígeno, mais estável será a interação.

Especificidade

A capacidadede ligaçãodaregiãovariávelde um anticorpoa um únicodeterminanteantigênico (ex: epítoposdamoléculade LPS).

Agregação visível de partículas

Eritrócitos Bactérias

Fungos

látex

Teste de Aglutinação - Princípio

Formação de agregados visíveis como resultado da interação de Ac específicos e partículas insolúveis que contenham determinantes antigênicos na superfície.

Comparadas à precipitação, as técnicas de aglutinação são mais sensíveis, necessitando de uma quantidade de

Ac 500 vezes menor, pois as partículas amplificam a reação.

Teste de Aglutinação - Princípio

Aplicações:

-Tipagemsanguínea(ABO), Coombs (Rh), VDRL (sífilis), ASLO (anti-estreptolisinaO),

FatorReumatóide, bHCG, ProteínaC Reativa.

-Detecçãode aumentodo títulosde Ac –(4x) (infecções virais e bacterianas - soroconversão)

Aglutinação/Hemoaglutinação

Aglutinação/Hemoaglutinação

Zonade maior Aglutinação

Principio –formaçãode imunocomplexospelade equivalênciade Ag e Ac

-Vantagens: Método simples, de fácil execução, baixo custo, rápido;

- Desvantagens: sensibilidade e especificidade relativamente baixas sendo que o mal armazenamento de reagentes (ex: hemácias), pode levar a resultados falso-negativos.

Aglutinação/Hemoaglutinação

Aglutinação/ Sistema ABO Aglutinação/ Sistema ABO

Aglutinação/ Sistema ABO

2) Reagente (anticorpo anti A, B):

1) Amostra de sangue na placa teste:3) Controle negativo: 4) Mistura-se:

Aglutinação/ Sistema ABO negativo positivo

Zona de excesso de anticorpo

Zona de equivalência

Zona de excesso de antígeno

Anticorpo livre Antígeno livre

Percentual de imunocomplexo precipitado

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