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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANAUNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLDEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLÓÓGICASGICAS DISCIPLINA: EVOLUDISCIPLINA: EVOLUÇÇÃO CELULARÃO CELULAR Curso: Ciências BiolCurso: Ciências Biolóógicasgicas

Profa. Lia dProfa. Lia d’’Afonsêca P. de MirandaAfonsêca P. de Miranda

Replicação do DNA Fluxo da informação genética

DNARNA PROTEÍNAS

Replicação Alberts et al., Molecular Biology of the Cell,4thed

• Semiconservativa Replicação do DNA -Características

Molécula paterna

Moléculas filhas

Moléculas netas

Rplicação semiconservativa do DNA. São mostradas as cadeias de DNA progenitora e as cadeias filhas em três gerações sucessivas

Marcação de DNA por incorporação de N pesado

Alberts et al., Molecular Biology of the Cell,4thed

Bactérias em meio contendo nitrogênio leve

Bactérias crescendo em meio contendo nitrogênio pesado

Extração do DNA das células

Suspensão do DNA em cloreto de césio

Centrifugação

•Ocorre no sentido 5’→3’ Alberts et al., Molecular Biology of the Cell,4thed

ReplicaReplicaReplicaççção do DNA ão do DNA ão do DNA ---CaracterCaracterCaracterííísticassticassticas

Reação irreversível

•Tem início em origens de replicação

Em célula eucariótica: múltiplas origens Lodish et al., Molecular Cell Biology,5thed

ReplicaReplicaReplicaççção do DNA ão do DNA ão do DNA ---CaracterCaracterCaracterííísticassticassticas

Estágios do início da replicação em oriC

1.Complexo inicial –sítios específicos para reconhecimento das proteínas iniciadoras 2.Complexo aberto –abertura das duas hélices nas sequências ricas em AT 3.Complexo pré-priming –helicase jáatuando, mantém as duas fitas dissociadas

Na região das origens foram caracterizados dois grupos de sequências: -4 sequências repetidas com nove pb,cujo consenso é5’TTAT(C/A)CA(C/A)A 3’

-9 sequências repetidas de 13 pb ricas em AT

Em procariotos ReplicaReplicaReplicaççção do DNA ão do DNA ão do DNA ---CaracterCaracterCaracterííísticassticassticas

* Presentes também em bacterófagos, plasmídeos e organelas

ReplicaReplicaReplicaççção do DNA ão do DNA ão do DNA ---CaracterCaracterCaracterííísticassticassticas •A replicação ébidirecional

Abertura da hélice mostrando a bolha de replicação e as forquilhas de replicação que movem-se em direções opostas

Alberts et al., Molecular Biology of the Cell,4thed

•Assimétrica (em procariotos e eucariotos) ReplicaReplicaReplicaççção do DNA ão do DNA ão do DNA ---CaracterCaracterCaracterííísticassticassticas

-Adição contínua de nucleotídeos -Adição descontínua de nucleotídeos

Lodish et al., Molecular Cell Biology,5thed

ReplicaReplicaReplicaççção do DNA ão do DNA ão do DNA ---CaracterCaracterCaracterííísticassticassticas •O início da replicação depende de um primer de RNA

Alberts et al., Molecular Biology of the Cell,4thed

•A DNA polimerase éautocorretiva (ação das nucleases)

ReplicaReplicaReplicaççção do DNA ão do DNA ão do DNA ---MecanismosMecanismosMecanismos Enzimas que atuam no processo de replicação

• Proteínas iniciadoras •Helicase

•Primase –síntese do RNA iniciador (primer)

•DNA polimerase

-polimerização de nucleotídeos (polimerase)

-mecanismo de verificação –remoção de erros (nuclease)

•DNA ligase une os fragmentos de DNA na fita descontínua •Nuclease –degradação do primerapós o início da replicação

•Polimerase de reparo –substitui o RNA iniciador por DNA

ReplicaReplicaReplicaççção do DNA ão do DNA ão do DNA ---MecanismosMecanismosMecanismos

Formação das fitas contínua e descontínua

Stryer et al, 2004

Alberts et al., Molecular Biology of the Cell,4thed

Replicação do DNA -Mecanismos

Proteínas na forquilha de replicação, modelo simplificado mostrando as enzimas atuando independentemente na duas fitas

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