Sinalização celular-aula seminário BIOCEL

Sinalização celular-aula seminário BIOCEL

Viçosa, Novembro, 2011

Doutoranda em Biologia Celular e Estrutural

Reorganization of the actin cytoskeleton upon G-protein coupled receptor signaling

ARTIGO Fator de impacto: 5.275

INTRODUÇÃO Receptores associados à proteína G:

Família de receptores de superfície celular encontrados em todos os eucariotos;

Transdução de estímulos extracelulares.

Alberts et al. (2010) e Pierce at al. (2002)

INTRODUÇÃO Receptores associados à proteína G:

Receptores ativados de modo específico: adrenalina, acetilcolina e serotonina;

Receptores sinuosos.

Alberts et al. (2010)

Alberts et al. (2010); Bockaert e Pin (1999). Receptores associados à proteína G:

INTRODUÇÃO Receptores associados à proteína G:

GPCR: função na célula

Sinalização através ligantes extracelular

Processos inflamatórios Neurotransmissão

Metabolismo Celular

Diferenciação celular

Lagerstrom et al. (2008) e Heilker et al. (2009).

INTRODUÇÃO Proteína G:

Moléculas transmissoras do sinal extracelular;

Mudança conformacional da subunidade α;

Alberts et al. (2010)

INTRODUÇÃO Proteína G:

Alberts et al. (2010)

INTRODUÇÃO PKA / cAMP:

Alberts et al. (2010)

INTRODUÇÃO PKA / cAMP:

Alberts et al. (2010)

INTRODUÇÃO PKA / cAMP:

Alberts et al. (2010)

INTRODUÇÃO PKA / cAMP e citoesqueleto:

 Mudanças na arquitetura celular;

Morfologia do neurônio;

Dissolução do estresse das fibras do citoesqueleto ;

Tilakaratne et al. (2005) e Bockaert et al. (2004)

cAMP

Src

Erk Dissolução

do estresse das fibras

RhoA Estresse da fibra citoesqueleto

Cotton e Claing (2009)

PKA / cAMP

INTRODUÇÃO Serotonina 1 A receptor

Ganguly et al. (2011).

Superfamília dos sete domínios transmembrânicos;

Potencial terapêutico relacionados ao estresse e ansiedade;

Sobrevivência dos neurônios.

Serotonina 1 A receptor:

Regulação da cascata de sinalização e síntese de DNA;

Inibição de Adenilil Ciclase;

Monitorar a formação da actina do citoesqueleto

Ganguly e Pucadyl (2008).

Formação dos filamentos de actina:

Alberts et al. (2010).

G-actina F-actina

INTRODUÇÃO Funções:

Alberts et al. (2010).

Forma da superfície celular; Posicionamento de macromoléculas;

Transporte de organelas;

Movimentação.

cAMP(intracelular)

Ganguly et al. (2011). Serotonina 1 A receptor e reorganização da actina:

Desestabilização da actina;

Receptor 1A serotonina Reorganização do citoesqueleto.

Explorar os efeitos do receptor para a serotonina, sinalizando a organização dos filamentos de actina que formam o citoesqueleto.

METODOLOGIA Cultura de células e tratamentos:

Citochalasina (CD)

Jasplacinolide (Jas)

Forskolina (Fsk)

Cultura de células e tratamentos: Microscopia confocal ;

Estimativas dos níveis de cAMP;

Tampão de lise Centrifugação Quantificação de cAMP do sobrenadante

RESULTADOS Quantitativo estimado de organização de F-actina

Fig.1

Jas Lat A

Controle

Níveis de cAMP nas células tratadas com agentes envolvidos na sinalização do receptor 1A serotonina

Fig.2.1

RESULTADOS Organização da actina

Fig.2.2

RESULTADOS Despolimerização de F-actina

Reversível nas células tratadas com Fsk + 5-HT; Reversível nas células com Fsk +H-89;

Serotonina1A receptor

Redução dos níveis de cAMP.

RESULTADOS Desestabilização da F-actina

Altos níveis de cAMP PKA; Níveis altos de cAMP

Competividade de H-89 ao PKA cAMP livre.

Aumento nos níveis de cAMP relacionados a redução de F-actina

DMSO Fsk

Aumento nos níveis de cAMP relacionados a redução de F-actin

Fig.4

DMSO Fsk Fsk + H-89 H-89

Aumento nos níveis de cAMP relacionados à redução de F-actin

Fig.4

RESULTADOS Fsk

Aumenta os níveis de cAMP;

Aumento de F-actina; “Salvamento” da F-actina.

cAMP e os agentes que causam a despolimerização da F-actina

DMSO CD Lat A Jas

DMSO Fsk

 Agentes despolimerizantes formam fragmentos

RESULTADOS na F-actina;

CD e LatA cAMP

Redução de F-actina; Reorganizar o citoesqueleto.

Reorganização da actina sobre o receptor1A de ativação da serotonina

Fig.6

Fsk Fsk + 5-HT

5-HT DMSO Control.

Reorganização da actina sobre o receptor1A de ativação da serotonina

Fig.6 Fsk Fsk + 5-HT 5-HT DMSO Control.

Reorganização da actina sobre o receptor1A de ativação da serotonina

Fig.8

O receptor da serotonina1A sinaliza um aumento de F-actina através da redução dos níveis de cAMP;

O aumento dos níveis de cAMP resulta em uma desestabilização de F-actina;

A desestabilização de F-actina resulta em um aumento da mobilidade do receptor da serotonina.

Serotonina 1A receptor

CONCLUSÃO Ganguly et al. (2011)

CONCLUSÃO Ganguly et al. (2011)

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